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多克隆抗体如何获得呢

原创 2022-03-02 22:29:28
多克隆抗体一般都是将抗原注射入动物体内(如兔子)时,一系列免疫细胞会与抗原结合,.. 精选答案
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多克隆抗体一般都是将抗原注射入动物体内(如兔子)时,一系列免疫细胞会与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。

具体操作步骤如下:

制备抗原,抗原可以是你体外表达纯化的蛋白或者蛋白特异性结构域,也可以用人工合成的保守多肽作为抗原。

兔子的准备,挑选健康兔子两只(约2Kg),稳定几天后进行首次取血.,作阴性参照用

兔子的免疫:将抗原注射两只兔子,抗原缓冲溶液必须不含对兔子有害的化学试剂,每只兔子初次免疫400ug抗原比较适合,后续免疫每次为100ug即可。一,将1ml的佛氏完全佐剂与准备好的1ml抗原充分混匀,呈乳白色;二,小心从笼中取出兔子,每只兔子免疫4个部位(背部和大腿根部均可),每个部位250ul,针头呈45度角插入皮下1-2cm。

免疫周期为20天,免疫完后7-10天取血(包括中途测试取血和最终放血),总共免疫两次以上。

效价检测:抗体效价检测达到100万以上后可以对兔子进行终放血

抗体的纯化:利用亲和层析纯化抗体,在得到洗脱的抗体后,经蔗糖或聚乙二醇浓缩后于PBS中透析除盐

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来自百学网

刘老师

刘老师

中国人大教育学硕士

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